ICS65.020
B16
中华人民共和国农业行业标准
NY/T2864-2015
葡萄溃疡病抗性鉴定技术规范
Technical specification for evaluation of grape resistance to grapevine dieback
2015-12-29发布
2016-04-01实施
中华人民共和国农业部发布
NY/T2864-2015
前言
本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。
本标准由农业部种植业管理司提出。
本标准由全国果品标准化技术委员会(SAC/TC510)归ロ。
本标准起草单位:北京市农林科学院。
本标准主要起草人:李兴红、燕继晔、张玮、严红、乔广行。
rY/T2864~-2015
葡萄溃疡病抗性鉴定技术规范
1范围
本标准规定了葡萄抗溃疡病( grapevine dieback)鉴定方法和评价方法。
本标准适用于葡萄( Vitis I.)抗溃疡病的室内鉴定及抗性评价。
2规范性引用文件
下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文
件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件
葡萄溃疡病 grapevine dieback
由葡萄座腔菌科( Botryosphaeriaecae)真菌引起的葡萄真菌性病害。
注:病原菌危害果穗和枝条,果实在转色期表现症状,穗轴出现黑褐色病斑,向下发展引起果梗干枯致使果实腐烂脱
落或干缩;危害枝条引起溃疡斑,有时病斑上着生许多黑色小点,严重时还可造成整个植株枯死。该病在我国主
要由可可毛色二孢 Lasiodiplodia theobromae和葡萄座腔菌 Botryos phaeria dothidea引起
分生孢子器
真菌的一种无性子实体,由菌丝体构成,近圆形?顶部有一小孔口,内壁生有许多短小的分生孢子
梗,梗上长有分生孢子。
抗性评价 evaluation of resistance
根据采用的技术标准判別植物寄主对特定病虫害反应程度和抵抗水平的描述
4试剂与材料
除非另有说明,本规范所用试剂均为分析纯,水为GB/T6682规定的三级水
4.1马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)培养基
马铃薯200g,葡糖20g?琼脂20g。将马铃薯去皮、切成小块,用水煮沸30min,纱布过滤,加入
葡萄糖和琼脂粉,滤液定容至1000mL,121℃高压灭菌20min
4.22%水琼脂培养基(WA)培养基
琼脂20g,用水定容至1000mI-,121℃高压灭菌20min
仪器设备
5.1恒温培养箱
温度范围:0C~50C,温度波动:士1C。
5.2光学显微镜
NY/T2864-2015
目镜:10X;物镜:10×,40×。
5.3超净工作台
洁浄等级:100级@≥0.5pm,平均风速:0.25m/s~0.6m/s
5.4高压灭菌锅
温度范围:0C~135℃,灭菌时间范围:4min~-120min,最高工作压力:0.22MPa~0.25MPa。
5.5
干热灭菌箱
温度范围:室温十10℃~250℃,温度波动:士1C。
6接种体制备
6.1病菌分离纯化、保存
6.1.1病原菌分离培养
PUBL
从葡萄枝干病斑边缘或者发病果梗粒的病健交界处剪取大5m×0.5cm的病组织3块
块,用75%乙醇溶液消毒90A,然序用灭的三级水神洗3次用灭纸将水吸主、置于直径为9cm
的PDA平板上,每个平板放くA作在超合し方条代た或、恒培养箱中(23
1)℃培养。
1.2病原菌纯化
病分离物养/山人生长的ャ量確新P争基-15d左
右?菌落表面开始形成分生孢子器将分生う器转移75ッと冷液消毒处埋的玻片上,用解剖刀
将分生孢子器破碎后转移含有1m/んす水自15レ离管中、分混匀后经2层接镜过滤到
个新的15mL管女ッーたた、みれプ0个予的悬浮
液,吸取100:孢
均匀涂布于%的水京脂培养基上、在超争工作台中
の28+1)℃条件
下培养至分生孢子南发、在光学鼓微镜(物镜:0×,目镜:10×)下镜检,挑取萌发的平个分生孢子置于
新的PDN培养,トローm知分未生分生中子则在本琼脂养
基上培养1d,挑取单菌圣
注:所有试材均需灭菌
om
613片
将剪至0.5m木小的ゲ、硫隊笑袋以及生袋
湿热灭菌2次口yリn。将待保存菌
株接种在PDA培养基上?放绿年片、(28で恒温培、至諸丝ちは年片产生分生孢子器
后,用镊子将滤纸片揭下、装入硫酸纸袋,在超争工作令中将装有带菌纸片的酸纸袋装人牛皮纸
袋,在超净工作台中吹干,密封于装有徒胶干燥剂的塑料包装容器中,在-20低温保存。
6.1.3.2石蜡油保存
将石蜡油混热灭菌2次,干热灭菌1次。制作PDA试管斜面将待保存菌株接种至斜面,待长满斜
面时将石蜡油加入试管中没过斜面约1cm、常温保存
6.2病原菌鉴定
依据病原菌形态和部分基因序列对接种用的菌株进行鉴定。可可毛色二孢( Lasiodiplodia theo-
brome)鉴定方法参见附录A,葡萄座腔菌( Botryos phaeria dothidea)鉴定方法参见附录B
接种体制备
将保存的菌株转接于PDA培养基上,(28土1)℃恒温培养箱中培养3d,在菌落离培养皿边缘处用
灭菌的5mm打孔器打菌饼备用。
室内抗性鉴定
7.1培养室