IKKl6对人胶质母细胞瘤U87细胞增殖和凋亡的影响.pdf

重庆医学2015年4月第4卷第12期
1617
论菩?基础研究doi:10.3969/f.issn.1671-8348.2015.12.010
IKK16对人胶质母细胞瘤U87细胞增殖和凋亡的影响
黄明火
(湖北省黄网市中心医院神经外科,湖北黄网438000)
[摘要]目的探讨I-B激酶(IKK)抑制剂IKK16対人胶质瘤U87细胞增殖和调亡的影响,并探讨其可能作用机制。方法
将体外培养的人胶质母细胞癪U87细胞分为4銀:空白组(末予干预处理),对照组(1%ニ甲基亚观),IKK16低剂量组(70nmol/
LIKK16)和IKK16高剂量组(200nmol/LIKK16),使用二苯基溴化四氩唑蓝(MTT)法检测IKK16对人胶质母细胞瘤U87增殖
的抑制作用, Western blot法检加药后48h细胞内p65、 Caspase-3、Bcl-2和 Cyclind1的表达。结果空白组与对照組U87细胞
増殖率比較,差异无计学意义(P>0.05);与对照组比较,IKK16可以显著抑制人胶质母细胞U87细胞的增殖,同时显著降低
细胞核内p65的表达(P<0.05),抑制 Cyclind1和Bcl2的表达,增加 Caspase-3的表达量(P<0.05),并呈剂量依赖性。结论
IKK16可以护制人胶质母细胞瘤U87细胞增殖并促进凋亡。
匚关键词]神经胶质瘤;IkB激酶;蜘胞增殖;细飑凋亡
[中图分类号]R651
文献标识码了A
文章编号]1671-8348(2015)12-1617-03
Effect of IKK16 on proliferation and apoptosis of human glioblastoma cell line 7
Fuang Minghuo
(Department of Neurosurgery, Huanggang Municibal Central Hos pital, Huanggang, Hubei 438000, China)
[Abstract] Objective To investigate the effect of IKB kinases(KK )inhibitor IK K16 on the proliferation and apoptosis of hu
man glioblastoma cell line U87 and its possible mechanism. Methods Human glioblastoma cell line U87 was cultured in vitro and
divided into 4 groups blank group(without intervention treatment), control group(1% dimethyl sulfoxide),low dose IKK group
(70 nmol /L IK K16) and high dose IKK group(200 nmol/L IKK16). The MTT assay was used to detect the effect of IKK16 on the
proliferation of U87 cells at the low concentration and the high concentration. Western blot was used to investigate the effect of
IKK16 on the expression of p65, cyclin D1, caspase- and bcl-2. Results The U87 proliferation rate had no statistical difference be
tween the blank group and the control group(P>0.05). Compared with the control group, IKK16 could significantly suppress the
proliferation of U87 cells(P<0.05).At the same time, 1KK16 significantly reduced the expression of p65, Cyclind1 and Bcl-2, and
increased the expression of caspase-3(P<0.05) with a dose-dependent manner. Conclusion IKK16 could suppress the proliferation
of human glioblastoma cell line U87 and promote the apoptosis.
Lkey words] glioma; i-kappa B kinase;cell proliferation; apoptosis
脑胶质瘤是中枢神经系统最常见的恶性肿瘤,在中国胶M2128)购自美国 Sigma公司,IKK16(2639)购自 Tocris bio-
质瘤的发病率较高,目前临床上对于胶质瘤的治疗主要手段 sclence公司。
是采取以手术为主辅放化疗的综合性治疗5,由于现有化疗1.2方法
药物对人脑胶质瘤细胞缺乏特异性的杀伤性,因此研究新型1.2.1人胶质母细胞瘤U87细胞的培养人胶质母细胞瘤
的、特异性更高的化疗药物对于脑胶质瘤的治疗具有重要意U87细胞复苏后接种于培养瓶中,培养基为含10%胎牛血清
义,以往研究证实核因子cB( nuclear factor kappa B,NF-cB)在的DMEM培养液,置于37℃、5%CO2的孵箱中培养,2~3d
胶质瘤的发生、侵袭和放化疗产生的耐药性中发挥重要的作传代1次,取处于对数生长期的细胞进行药物干预实验
用?,NF-xB活性主要靠蛋白激酶( IKB kinase,IKK)的调节,1.2.2药物处理及分组按每孔100L1×10的密度接种
IKK16是一种新型的IKK特异性抑制剂,本文通过探讨至96孔板中,每组19个副孔,另加100L的培养液,实验分
IKK16对人胶质母细胞瘤U87细胞增殖和濁亡的影响,以期为4组:空白组,对照组[1%二甲基亚砜(DMSO)],IKK16低
为临床上胶质瘤的治疗寻找新的治疗药物。
剂量组(70nmol/LIKK16)组,IKK16高剤量组(200nmol/L
1材料与方法
IK16),IKK16处理组的DMSO终浓度均控制在1%。
1,1材料细胞:人胶质母细胞瘤U87细胞由中科院上海细1.2.3MTT比色法检测细胞增殖将加药后的培养板置人
胞所提供。试剂:DMEM培养基购自 Gibco公司,胎牛血清购细胞培养箱中,于37℃、5%CO2条件下继续培养分别培养至
自杭州四季青生物技术有限公司,细胞总蛋白(P0013)、核蛋24、,48、72h,终止培养前4h各孔加入20 AL MIT溶液,终止
白与浆蛋白提取试剂(PO028)和ECL发光液(P0018)购自碧云培养时吸尽各孔内上清液,每孔加入150 L DMSO,振荡10
天生物技术公司;辣根过氧化物酶(HRP)标记兔抗鼠gG二min,在酶联免疫檢测仪上测定各孔吸光度值(A),结果取6个
抗(sc-2020)、Bcl-2、组蛋白H3、 Cyclind1、 Caspase3(sc-7148)、副孔的均值,并计算细胞増殖抑制率=(对照组A值一干预组
65(sc109)和H3(sc-8654),B肌动蛋白( B-actin,sc7210)的一A值》/对照组A值×100%
抗均购自美国 Santa Cru